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一文Get外泌體分離技術
外泌體是直徑爲30-150 nm的小細胞外囊泡。在生理和病理條件下，幾乎所有類型的細胞都可以釋放外泌體，在細胞通訊和表觀遺傳調控中發揮重要作用。外泌體天然存在于體液中，包括血液，唾液，尿液和腦脊液等，內部含有其來源細胞的核酸，蛋白等物質，因此基于外泌體的疾病診斷和治療方法得到了深入的研究。但是如何拿到純淨的外泌體一直是外泌體研究所面臨的難題之一，因此研究人員也開發了許多外泌體分離的方法，來一起看一下吧。
常見外泌體分離方法
01
差速離心法
離心力從300×g到100,000×g的下進行多次循環離心，最後收集外泌體顆粒。
02
密度梯度離心法
等密度梯度超速離心法是通過從下到上逐步降低密度分層（A）。動區梯度超速離心法由兩個梯度介質部分組成，樣品根據密度/質量/大小被依次分離（B）。
03
超濾法
超濾的外泌體分離示意圖。(A）串聯配置的微濾器，細胞外液通過串聯配置的微濾器收集外泌體。(B) 順序超濾，細胞外液依次通過不同直徑的過濾器收集外泌體。
04
切向流過濾
在切向流過濾過程中，進料流與膜面平行流動，施加的壓力使一部分水流根據過濾器的大小通過膜從而分離外泌體。
05
尺寸排阻層析
尺寸排除層析法的外泌體分離，溶液通過固定相，分子根據大小尺寸進行分離。
06
聚合物沈澱
聚合物沈澱含有外泌體的溶液中加入高親水性聚合物後，降低外泌體的溶解度並誘導其隨後的沈澱。
07
免疫親和捕獲
基于免疫親和的外泌體分離示意圖。識別外泌體特異性標志物的抗體和外泌體的流體一起孵育富集外泌體，通過額外的洗脫步驟收集外泌體。
08
微流體
集成微流體技術結合了外泌體分離和分析，將含外泌體的流體添加到介質中後，根據細胞外囊泡的物理和生化特性，分離外泌體，可以從少量體液中快速分離外泌體，並進行實時外泌體表征分析以進行原位診斷。
外泌體分離方法比較
01
差速離心法
• 優點：低成本低試劑汙染，適合大量制備。
• 缺點：費時費力，有設備要求，易有蛋白質聚集影響純度，不適合少量樣本。
02
密度梯度離心法
• 優點：純度高，可以分離外泌體亞群。
• 缺點：設備要求高，費時間，不適合少量樣本。
03
超濾分離
• 優點：成本低，速度快。
• 缺點：純度一般，剪切應力可能造成外泌體損傷，濾膜可能會導致外泌體損失。
04
尺寸排阻分離
• 優點：高純度，耗時短，保持外泌體的天然狀態，良好的重複性，樣本量適用範圍廣，樣本類型適用範圍廣。
• 缺點：成本高，需要額外的外泌體富集方法。
05
聚合物沈澱
• 優點：操作簡單，樣本量適用範圍廣，效率高。
• 缺點：蛋白質聚集合其他囊泡的汙染，可能影響後續的分析和量化。
06
免疫親和捕獲
• 優點：適用于特定來源的外泌體，純度高，方便，無試劑汙染。
• 缺點：抗體成本高，外泌體標記需要篩選優化，産量低，洗脫可能會損傷外泌體結構。
07
微流控技術
• 優點：高效方便，可實現自動化並和診斷。
• 缺點：只適合小樣本分離。
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産品信息
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货号 |
名称 |
规格 |
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41201ES25/50 |
25/50 mL |
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41202ES30 |
30 mL |
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41204ES10/30new |
10/30 T |
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41203ES05 |
5 T |
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52321ES05 |
2 mg |
參考文獻
Yang D, Zhang W, Zhang H, Zhang F, Chen L, Ma L, Larcher LM, Chen S, Liu N, Zhao Q, Tran PHL, Chen C, Veedu RN, Wang T. Progress, opportunity, and perspective on exosome isolation - efforts for efficient exosome-based theranostics. Theranostics. 2020 Feb 19;10(8):3684-3707. doi: 10.7150/thno.41580. PMID: 32206116; PMCID: PMC7069071.