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SafeRed®/DuGreen® 核酸染料（10000× 水溶液）
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SafeRed®/DuGreen® 核酸染料（10000× 水溶液）
 
Product number          DIB013-500ul   
specification                500ul   

SafeRed®/DuGreen®核酸染料特点:
1. 带形清晰整齐：第三代SafeRed®和DuGreen®完全克服了原装国外相同染料分不开大片段DNA的缺点，所有电泳条带清晰整齐美观。
2. 安全无毒：独特油性大分子使其不能穿透细胞膜进入细胞， Ames-test实验表明，该染料的没有EB类似的诱变性。
3. 迁移率好：EB小分子很快跑出胶外，所以EB容易导致小DNA片段看不清，我们的大分子SafeRed完全克服这一点。
4. 定量准确：适用于核酸分子大小的确定和定量，EB对小DNA片段定量不准确。
5. 染色均匀：电泳时染色均匀，靠近负极凝胶和靠近正极端的亮度一样。EB会导致胶的整体背景稍微高些，经常出现阴   阳背景（胶的背景一部分亮一部分暗）；EB长时间、长距离的电泳，EB信号强度会相应下降。我们的大分子SafeRed完全克服这一点。
6. 灵敏度高：适用于各种大小片段的电泳染色，对核酸迁移的影响小于SYBR Green I。
7. 稳定性高：耐热，可加在缓冲液里，100℃溶解凝胶，防止染色剂没充分混匀。适用于使用微波或其它加热方法制备琼脂糖凝胶；室温下在酸或碱缓冲液中极其稳定。
8. 耐光性强：实验室的日常光线照射环境下可以常温放置24个月。
9. 信噪比好：样品荧光信号强，背景信号低，荧光亮度是EB的十倍以上，肉眼可观测到亮度明显比EB强，EB会导致胶的整体背景稍微高些，经常出现阴阳背景。
10. 操作简单：与EB用法完全一样，在预制胶和电泳过程中染料不降解；而电泳后染色过程也只需30 分钟且无需脱色或冲洗 ，即可直接用紫外凝胶透射仪观察。
11. 适用范围广：可选择电泳前染色（胶染法）或电泳后染色（泡染法）；适用于琼脂糖凝胶或聚丙烯酰胺凝胶电泳；可用于 dsDNA、ssDNA 或 RNA 染色。
12. 完美兼容：与EB有相同的光谱特性，无需改变滤光片及观察装置：标准的 EB 滤光片或 SYBR 滤光片都适用，使用与观察EB相同的普通紫外凝胶透射仪观察即可，在 300nm 紫外光附近可得到最佳激发。
产品包装：   SafeRed® 10000x Nucleic Acid Dye  500uL/支；    SafeGreen® 10000x Nucleic Acid Dye  500uL/支
储存条件：  室温避光可保存24个月。
 
操作步骤：
一．胶染法（推荐方法，用法类似EB）
制胶时加入SafeRed 核酸染料(染料灵敏，每100mL 琼脂糖溶液中加入10μL SafeRed 原装液即可)。 按常规方法电泳。
1. 实验室材料和试剂：
（1） 实验样品：质粒DNA，DNA marker（国产的DNA marker浓度太高，至少稀释2～3倍后使用）
（2） TBE缓冲液配置：10X TBE电泳缓冲液[Tris 107.8146g (890mM),硼酸55.0287g(890mM)，EDTA 5.845g(20mM),加NaOH约4g调节pH=8.3；定容1000mL]；用ddH2O稀释10倍配制1X TBE电泳缓冲液。
（3） TAE缓冲液配置：50X TAE电泳缓冲液[Tris 242g (2M),EDTA 37.2g(100mM),加醋酸约57ml调节pH=8.5；定容1000mL]；用ddH2O稀释50倍配制1X TAE电泳缓冲液。
（4） 溴酚蓝指示剂，1%的西班牙琼脂糖凝胶
（5） 仪器：电泳仪（130v），移液器(0.5~10ul)，凝胶成像仪
2. 实验步骤：
（1） 制胶：将0.5g琼脂糖溶于50mL 1X TBE电泳缓冲液中，加热至琼脂糖完全融化。将融好的琼脂糖溶液室温放置50℃左右加入5ul的SafeRed凝胶电泳染料，摇匀。
（2） 倒胶：将制好的琼脂糖凝胶缓慢倒于制胶托盘内，避免产生气泡。将点样梳子垂直置于电泳胶膜的一端，距离托盘底部约1mm。放置时尽量保持平稳，切勿晃动。
（3） 置胶：待约30分钟左右胶体充分凝固后，缓慢垂直向上拔起点样梳子，切勿用力过猛。（夏季适当延长凝胶时间）
（4） 将琼脂糖凝胶放入电泳槽内，加入电泳缓冲液，使电泳缓冲液液面高于凝胶面约1~2mm。
（5） 将混合溴酚蓝指示剂的DNA样本（1ul溴酚蓝与2ul DNA标本混合）加入到点样孔内。
（6） 盖上电泳槽盖，开启电源，使DNA从负极移向正极恒压电泳(电压恒定在120~130v之间，一般可选择130V)。
（7） 当DNA条带距离点样孔约1~2cm后关闭电源，(约30～40分钟)取出凝胶。
（8） 用 302nm 激发的 UV 凝胶成像系统观察结果。
*注：此方法染色染料用量相对较少。染料加入胶中可直接使用微波炉加热，制好的胶溶液可以在室温下保存直至用完。

优化电泳条件参考事项：
因为EB是插入DNA内部变成一个整体分子，所以不容易出现迁移/弥散的问题，而大分子的SafeRed与DNA是通过静电吸引非共价结合的，在DNA外面就容易出现条带迁移，特别是大片段DNA！
1) 鉴于SafeRed的高灵敏性，建议减少DNA的上样量。样品最佳上样量为～100ng/泳道(8泳道小胶孔)。
2) 部分国产的DNA marker浓度太高，至少稀释一倍后使用！染料过于灵敏，特别是大片段marker！目前国产的marker是基于EB染料开发的酶切的混合片段， EB显示不出来酶切的混合片段的杂带，SafeRed的高灵敏性会显示出来。少数情况下质粒经某些酶切后的DNA样品会出现拖尾和分辨率降低, 请使用后染法。
3) 更换电泳缓冲液，新配置的电泳液效果好！建议用1×TBE缓冲液代替TAE，因为含硼酸盐的试剂导电性能更好。
4) 电泳时电压不宜过高，一般不要超过130V。与EB相比，SafeRed电泳电压要低一些，跑胶的时间长一些。
5) 染料无需低温冷藏，室温下避光储存即可，以避免沉淀；若有沉淀，将染料加热至40~50℃并充分振荡溶解，不影响使用。
6) 个别客户用染料和样品混合后，点样到琼脂糖凝胶中，不推荐这种点样法。
7) 由于GelRed具有良好的热稳定性，可以在热的琼脂糖溶液中直接添加，然后充分振荡以保证染料充分混匀。也可以选择将GelRed储液加到琼脂糖粉末和电泳缓冲液中，然后用微波炉加热以制备琼脂糖凝胶。
8) 如果总是看到条带弥散或分离不理想，建议使用电泳后染胶。
*此方法不适合预制聚丙烯酰胺凝胶，对于聚丙烯酰胺凝胶请使用泡染法。
 
二．泡染法
（1）按照常规方法进行电泳。 用于胶回收等高浓度DNA样品强烈推荐泡染法！
（2）用H2O将SafeRed® 10,000× 储液稀释约3,300倍到0.1M NaCl溶液中，制成3× 染色液。（例如将15μL SafeRed® 10,000× 储液加入到50mL 0.1M NaCl溶液中）。
（3）将凝胶小心地放入合适的容器中，如聚丙烯容器中。缓慢加入足量的3× 染色液浸没凝胶。室温振荡染色30min左右，最佳染色时间根据凝胶厚度以及琼脂糖浓度不同而略有不同。对于含3.5～10％丙烯酰胺的凝胶，染色时间通常介于30min到1h，并随丙烯酰胺含量增加而延长。
（4）用 302nm 激发的 UV 凝胶成像系统观察结果。
*注意事项：用泡染法染色时，染料用量较多。单次使用的染色液可重复使用3次左右；3× SafeRed®染色液可以大量制备，在室温下避光保存直至用完。
 
三．核酸电泳的PAGE步骤：
1）将TBE制备的凝胶放入电泳槽中，用夹子夹住边缘。
2）用配置凝胶溶液同一批次的5×TBE灌满缓冲液槽。用注射器排除凝胶底部的气泡。
3）用注射器吸取1×TBE冲洗加样孔。将DNA样品和适量的6×凝胶上样缓冲液混合，用微量移液管加入加样孔。
4）将电极与电源相连（正极接下槽），打开电源一般90V；1～8V/cm。进行电泳9h。
5）电泳至标准参照染料迁移至所需位置（一般是电泳到二甲苯完全迁出，溴酚蓝距底边2～3cm停止）。关闭电源，拔掉插头，弃去电泳槽中的电泳液。
6）将凝胶取下来放入，染色皿中，加3X SafeRed的1X缓冲液中的振荡染色30-60分，放置在紫外检测即可。
*注意事项：与琼酯糖凝胶不同，不能用预染或点染的方法；只能用泡染的方法显色，由于聚丙烯酰胺比较致密，染料不容易深入，显色效果没有琼酯糖凝胶好。
特别提醒：如果用的是紫外成像仪，请选择SafeRed；如果使用激光成像仪或在可见光下观测，请选择DuGreen。