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Lipo2000转染试剂
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Lipo2000转染试剂


产品编号：DIB034-1.5ml      DIB034-0.75ml
产品规格：1.5ml                   0.75ml

保存：2-4℃保存一年。（避免冷冻）

产品说明:
        Data Invention Biotech  独有专利配方Lipo2000转染效率介于Lip2000和Lip3000之间，毒性更低，转染效率更高，是一种新型的阳离子脂质体转染试剂。适合于将核酸(DNA和RNA)转染入真核细胞，具有低细胞毒性；对多种类型的细胞和培养板都具有高转染效率；转染时血清的存在不影响转染效率的优点。         

适用范围：贴壁细胞和悬浮细胞（哺乳动物细胞系）的转染。


质粒DNA的转染:对大多数细胞来说，DNA(µg)与Lipo2000 (µl)的比例为1:2~1:3。转染时高的细胞密度可以得到高的转染效率和表达水平，并能减少细胞毒性。
1. 以24孔板为例
贴壁细胞： 转染前一天，用500 µl不含抗生素的培养基接种0.5～2×105细胞，使之第二天能达到70-90%汇合。
悬浮细胞：在准备DNA-Lip2000复合物之前，用500 µl不含抗生素的培养基接种4～8×105细胞即可。
 
2. 对每个转染样品，进行以下操作
a. 在eppendorf管里分别加入50 µl Opti-MEM I ReLipced Serum Medium和0.8 µg DNA轻柔混匀，制成DNA稀释液。
b. 在另一个eppendorf管里分别加入50µl Opti-MEMI ReLipced Serum Medium和2.0 µl Lipo2000(注意用前先混匀)，轻柔混匀，制 成Lip2000 稀释液，室温静置5分钟。
c. 将DNA稀释液和Lip2000稀释液混合，轻柔混匀，室温静置20分钟， 形成DNA-Lip2000复合物。DNA-Lip2000复合物在室温下可稳定存在6小时。
 
3. 将DNA-Lip2000复合物加入到接种好的细胞中，将培养板轻轻地前后摇动，使复合物分散均匀。
4. 在37℃ CO2培养箱中培养4-6小时后更换培养基,继续培养18～48小时。
5. 如果要筛选稳定细胞株，则在转染24小时后将细胞按照1:10或更高的比例接种到新鲜培养基中，第二天加 入选择性培养基进行筛选。
 
质粒DNA转染的优化 为达到最高的转染效率和降低细胞毒性的影响，可以对DNA和Lip2000的比例以及细胞密度进行优化，一 般在1:0.5~1:5的范围内优化DNA (µg)和Lip2000 (µl) 的比例。

不同细胞培养板中转染时培养基、核酸及Lipo2000用量
细胞培养板 每孔面积 培养基用量 DNA转染 siRNA
铺板培养基用量 稀释培养基用量
96-well 0.3cm2 100ul 2*25ul 0.2ug 0.5ul 5pmol 0.25ul
24-well 2cm2 500ul 2*50ul 0.8ug 2ul 20pmol 1.0ul
12-well 4cm2 1ml 2*100ul 1.6ug 4ul 40pmol 2.0ul
6-well 10cm2 2ml 2*250ul 4ug 10ul 100pmol 5ul
60-mm 20cm2 5ml 2*0.5ml 8ug 20ul 200pmol 10ul
10-cm 60cm2 15ml 2*1.5ml 24ug 60ul 600pmol 30ul


常见细胞的转染效率（仅供参考，实验条件不同转染效率会有差别）
细胞种类 HEK293 HCT116 WRL-68 HepG2 NH/3T3 THP-1 Hela MCF-7 293T TS cell HO1980 A549
转染效率 ＞80% ＞80% ~80% ~80% ~80% ＞50% ＞80% ＞80% ＞80% ＞60% ＞60% ＞80%
                         
细胞种类 MEF Chok1 Hep3B C2C12 Neuro-2a HUVEC MDCK Hep2C WHI B50 Calu1 L929
转染效率 ＞50% ＞50% ＞80% ＞80% ＞70% ＞80% ＞80% ＞80% ＞80% ＞70% ＞70% ＞70%

产品参数
Name Lipo2000转染试剂
CAT# DIB034-1.5ml          DIB034-0.75ml
CAS# N/A
Storage# 4℃干燥避光
Shelf Life# 12个月
Ex(nm)# N/A
Em(nm)# N/A
MW# N/A
Solvent# N/A